常規免疫沉淀(IP)的痛點:
免疫沉淀(IP)后的免疫印跡(WB)過程中必然涉及到免疫沉淀用一抗(多為IgG)的變性,因此如果使用傳統的二抗(非還原和還原型的IgG均能檢測到)會在印跡膜上出現雜帶的干擾,也就是說,由于傳統的二抗能與還原型的IgG結合,在印跡膜上顯示出~55kDa的重鏈條帶和~23kDa的輕鏈條帶,這些均為非特異性條帶,對免疫印跡結果的分析帶來很大干擾。
為什么要選擇TrueBlot ?
TrueBlot?產品線旨在解決在對免疫沉淀 (IP) 或共免疫沉淀 (Co-IP) 樣品進行蛋白質印跡時遇到的常見實驗問題。TrueBlot?二抗的獨特檢測特性可識別天然(非還原)形式的 IgG而不是還原形式的 IgG,以消除 IP 抗體變性重鏈和輕鏈的干擾,當與TrueBlot? IP微珠搭配使用時,TrueBlot?產品系列可助您輕松獲得可重現的、出版質量的IP/Co-IP-Western印跡結果。
TrueBlot產品介紹及結果展示:
HRP標記TrueBlotTM系列二抗
TrueBlotTM系列二抗為美國ROCKLAND公司的專利產品,因為TrueBlotTM系列二抗能夠特異性的結合帶有天然二硫鍵結構的IgG(Goat, Mouse或Rabbit),因此能夠僅檢測非還原型的IgG(一抗IgG天然構象)。
使用TrueBlotTM系列二抗則可避免上述情況,特異地檢測出免疫沉淀而得的抗原(如下圖)。
當使用IP分離蛋白時,捕獲抗體與目標蛋白質結合(Step 1),添加Protein A 或Protein G 包被的磁珠以固定抗體-目標蛋白質復合物(Step 2)并洗掉不需要的材料(Step 3)。常規IP中的最后步驟通常包括使用加熱和還原/變性劑使蛋白質變性(Step 4)。
當洗脫的IP樣品通過SDS-PAGE分離(Step 5),后續Western blot中使用的相同一抗進行檢測,然后分別使用常規二抗和TrueBlotTM二抗檢測時,結果表面:使用常規二抗檢測時,捕獲抗體的重鏈和輕鏈都可以檢測到(Step 5 右圖),這可能會掩蓋您感興趣的蛋白,特別是如果它的大小與IgG重鏈或輕鏈相近時,使用TrueBlotTM二抗檢測時,只檢測到特異性的目的蛋白(Step 5 左圖)。 | |
用anti Mouse IgG TrueBlotTM檢測結果 | 用傳統的HRP標記anti-Mouse IgG二抗進行檢測結果 |
由結果可知:用傳統的HRP標記二抗檢測時會出現輕鏈和重鏈條帶,而用TrueBlotTM二抗檢測時則沒有,表明TrueBlot?二抗僅識別天然(非還原)狀態的一抗,消除重鏈和輕鏈條帶的干擾,以為免疫沉淀樣品提供準確、出版質量的WB結果。
熒光標記TrueBlot二抗:
Fluorescent TrueBlot是一款功能強大、特異性高的產品,可與近紅外染料搭配使用。
Fluorescent TrueBlot?:Anti-Rabbit IgG DyLight? 680的western blo結果: Lane 1: Rabbit IgG, 非變性. M: Marker. Lane 2: Rabbit IgG, 變性. |
TrueBlotTM系列微球
Mouse TrueBlot IP瓊脂糖珠VS傳統IP磁珠 |
TrueBlot產品特點:
1、完全排除的免疫沉淀用一抗重輕鏈的干擾,結果清晰、準確,特異性強;
2、使用簡單,僅將傳統的二抗替換成TrueBlotTM系列二抗即可。
注意要點:
1、需對免疫沉淀物進行徹底還原;
2、免疫印跡時需用牛奶作為封閉液,而不能用BSA(牛血清白蛋白),因為后者的封閉作用不強;
3、當用Rabbit IgG TrueBlotTM對免疫印跡膜進行檢測時,要先用anti-IgG微球來進行免疫沉淀步驟,而不能使用Protein A或Protein G微球,因為后者與Rabbit IgG有很強的親合力,會引起污染。
TrueBlot系列產品推薦:
類別 | 貨號 | 產品名稱 | 規格 |
免疫沉淀后WB用抗體 | RKL-18-8817-30 | Mouse TrueBlot ULTRA: Anti-Mouse Ig HRP | 20uL |
RKL-18-8817-31 | Mouse TrueBlot ULTRA: Anti-Mouse Ig HRP | 50uL | |
RKL-18-8817-33 | Mouse TrueBlot ULTRA: Anti-Mouse Ig HRP | 200uL | |
RKL-18-8816-31 | Rabbit TrueBlot ULTRA: Anti-Rabbit Ig HRP | 50uL | |
RKL-18-8816-33 | Rabbit TrueBlot ULTRA: Anti-Rabbit Ig HRP | 200uL | |
RKL-18-8814-31 | Goat TrueBlot ULTRA: Anti-Goat Ig HRP | 50uL | |
RKL-18-8814-33 | Goat TrueBlot ULTRA: Anti-Goat Ig HRP | 200uL | |
RKL-18-0217-32 | Fluorescent TrueBlot Anti-Mouse Fluorescein | 100uL | |
RKL-18-4417-32 | Fluorescent TrueBlot Anti-Mouse DyLight 680 | 100uL | |
RKL-18-4517-32 | Flourescent TrueBlot Anti-Mouse DyLight 800 | 100uL | |
RKL-18-0216-32 | Fluorescent TrueBlot Anti-Rabbit Fluorescein | 100uL | |
RKL-18-4416-32 | Fluorescent TrueBlot Anti-Rabbit DyLight 680 | 100uL | |
RKL-18-4516-32 | Fluorescent TrueBlot Anti-Rabbit DyLight 800 | 100uL | |
IP用微球(瓊脂糖珠/磁珠) | RKL-00-8811-25 | TrueBlot Anti-Mouse Ig IP Agarose Beads | 2.5uL |
RKL-00-8800-25 | TrueBlot Anti-Rabbit Ig IP Agarose Beads | 2.5uL | |
RKL-00-8844-25 | TrueBlot Anti-Goat Ig IP Agarose Beads | 2.5uL | |
RKL-00-1811-20 | TrueBlot Anti-Mouse IgG Magnetic Beads | 2uL | |
RKL-00-1811-50 | TrueBlot Anti-Mouse IgG Magnetic Beads | 5uL | |
RKL-PA00-18-2 | TrueBlot Protein A Magnetic Beads | 2mL | |
RKL-PA00-18-5 | TrueBlot Protein A Magnetic Beads | 5mL | |
RKL-PG00-18-2 | TrueBlot Protein G Magnetic Beads | 2mL | |
RKL-PG00-18-5 | TrueBlot Protein G Magnetic Beads | 5mL | |
RKL-S000-18-2 | TrueBlot Streptavidin Magnetic Beads | 2mL | |
RKL-S000-18-5 | TrueBlot Streptavidin Magnetic Beads | 5mL | |
RKL-B000-18-2 | TrueBlot Biotin Magnetic Beads | 2mL | |
RKL-B000-18-5 | TrueBlot Biotin Magnetic Beads | 5mL | |
RKL-TMS-06 | TrueBlot Anti-Goat Ig IP Agarose Beads | 6 tests | |
RKL-88-7788-31 | Mouse TrueBlot Set (IP Agarose Beads) | 50uL | |
RKL-88-1688-31 | Rabbit TrueBlot Set (IP Agarose Beads) | 50uL | |
RKL-88-1488-31 | Goat TrueBlot Set (IP Agarose Beads) | 50uL | |
IP及其后WB檢測用試劑盒 | RKL-88-8887-31 | Mouse TrueBlot Western Blot Kit | 50uL |
RKL-88-8886-31 | Rabbit TrueBlot Western Blot Kit | 50uL | |
RKL-88-8884-31 | Goat TrueBlot Western Blot Kit | 50uL | |
RKL-88-8887-215 | IP & WB Kit for GFP Epitope Tag | 1 Kit | |
RKL-88-8887-382 | IP & WB Kit for 6X HIS Epitope Tag | 1 Kit | |
RKL-88-8887-383 | IP & WB Kit for DYKDDDDK (FLAG) Epitope Kit | 1 Kit | |
RKL-KBA-PA00-18 | TrueBlot Protein A Magnetic Beads IP/Co-IP Kit | 20 tests | |
RKL-KBA-PG00-18 | TrueBlot Protein G Magnetic Beads IP/Co-IP Kit | 20 tests |
*上述產品僅限用于科研學術研究用途,不得用于醫療與診斷。
如何做好IP/Co-IP實驗,TrueBlot產品選擇指南:
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